古朵快讯：质粒转染试剂的相关知识点

　　转染(transfection)是细胞在一定条件下主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。质粒转染对于哺乳细胞蛋白的表达至关重要，转染的方法和步骤直接影响着转染的成功与否。

　　质粒转染试剂适用于24孔板培养的哺乳动物细胞，所有数量和体积均是按孔计算。大部分细胞系所使用的DNA(μg)与VigeneFection(μg)的比值为1:3或1:4，转染状态良好的细胞可获得高转染效率、高表达水平和低细胞毒性。转染步骤：

　　1、贴壁细胞：转染前一天每孔0.5-2×105个细胞接种于500μl培养基中，在转染时细胞可长至90-95%融合。

　　悬浮细胞：在配制转染液前每孔4-8×105个细胞接种于500μl培养基中。

　　2、转染液制备，每孔细胞用量如下：

　　A. 用50μlDMEM培养基(或者其他无血清培养基)稀释质粒DNA，轻轻混匀。

　　B. 取适量VigeneFection 在50μl DMEM培养基中稀释，室温孵育5min。

　　C. 将前两步所稀释的DNA和VigeneFection 混合，轻轻混匀，室温放置30min。

　　3、在每孔细胞中加入混合后的转染液，轻轻摇匀。

　　4、贴壁细胞可在转染4-6h后可更换培养基，悬浮细胞可在转染后的18-48h之间，对细胞进行换液。转染18-48h之后可检测基因表达。如果检测到蛋白表达，请在转染后24-72h收集培养液。

　　5、对于稳定转染，在转染24h后以1:10传代培养，第二天可加入选择培养基。

　　质粒转染试剂将外源核酸片段导入细胞，影响内源基因表达水平。在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂，例如在绵羊成纤维细胞转染过程中FuGene HD的转染效率更高，GenEscortTM I对小鼠胶质细胞则具有更好的转染效果。总之，可以遵循低毒等原则进行选择。在一定范围内，转染效率与质粒/转染试剂比值成正相关，但毒性也会增加。可以根据转染试剂推荐比例确定合适的合适的转染比例。

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