古朵阐述：ELISA试剂盒温育保温方法及原理
 

　　温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的适宜温度。在建立ELISA办法作反应动力学研讨时，实验标明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产品的生成可达高峰。

　　为加快反应，可进步反应的温度，有些实验在43℃进行，但不宜选用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜，以构成最多的堆积。但因所需时刻太长，在ELISA中一般不予选用。

　　温育保温的考究：

　　保温的办法除有的ELISA仪器附有特制的电热块外，一般均选用水浴，可将ELISA板置于水浴箱中，ELISA板底应贴着水面，使温度敏捷平衡。为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，此时可让反应板漂浮在水面上。若用保温箱，ELISA板应放在湿盒内，湿盒要选用传热性杰出的资料如金属等，在盒底垫湿的纱布，最终将ELISA板放在湿纱布上。

　　湿盒应先放在保温箱中预温至规矩的温度，特别是在气温较低的时分更应如此。无论是水浴仍是湿盒温育，反应板均不宜叠放，以确保各板的温度都能敏捷平衡。室温温育的反应，操作时的室温应严峻束缚在规矩的范围内，标准室温温度是指20-25℃，但具体操作时可根据说明书的要求操控温育。室温温育时，ELISA板只需平置于操作台上即可。

　　ELISA试剂盒的原理：

　　ELISA试剂盒为捕获抗体具有高亲和力、高特异性、低内毒素的单抗，研究者以刺激剂激活细胞时，不会影响活化细胞分泌细胞因子。ELISA试剂盒的原理是什么?

　　到目前为止，ELISA法仍在研究当中占有着主流地位，普遍应用使得实验更加方便、经济和准确， ELISPOT技术的优点也决定了它的发展潜力。LISPOT法来源于ELISA，相比较传统的ELISA法有所突破，是定量ELISA技术的延伸和发展。由于游离的循环抗体或CK的半哀期不同，使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合，传统的酶联免疫吸附法(ELISA法)不能确切的反映体内的抗体及CK的水平。80年代，国外的科研工作者根据ELISA技术的基本原理，建立了体外检测特异性抗体分泌细胞和CK分泌细胞的固相酶联免疫斑点技术(ELISPOT)。 人类原态胚胎干细胞无需转基因就能逃避分化，通过OCT4，KLF4，KLF2三种因子的表达可以维持其天然状态。研究人员利用兔ELISA试剂盒两种生成非转基因原态人类胚胎干细胞(hESCs)的方法路径。他们在加入初始培养基之前，首先令后致敏状态的人类胚胎干细胞接触组蛋白去乙酰酶抑制剂，这样初始培养条件下的八细胞胚胎就能直接建立一种新细胞系。

　　ELISA试剂盒的原理包括了可以提了两款改良型siRNA用于活体转染。可以增加siRNA-转运试剂复合体的稳定性。而SIRNAPLUS则不需要转运试剂，其转运载体就整合在siRNA分子上。为了解决这一问题，公司开发了一个试剂盒，可以将shRNA插入到基因组的特定位置。这一靶向整合试剂盒采用锌指核酸酶技术，将 shRNAELISA试剂盒插入到人类基因组的AAVS1位点。这一技术将shRNA定位在一个地方，使影响shRNA表达水平的一个重要变量固定下来。

　　ELISA试剂盒普遍用作非放射性同位素的成键化验。在这种方法中，通常标准配体是固定的，通过加入溶液相受体或蛋白质来使之成键。通过加入与受体特异性反应的抗体来定量成键的受体，而且一开始抗体的量以加入第二种能显色的抗体测量。第二种抗体能识别抗体的末端，在其末端的碱性磷酸酯或过氧化物酶等与酶发生反应，从而使溶液显色。

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