古朵快讯：抗体滴定的方法与操作步骤

　　抗体滴定 (antibody titration)就是确定合适的抗体用量和抗体浓度，以实现阳性信号尽可能强，而阴性信号尽可能低即得到合适的S/N(信噪比值)。一般抗体供应商都会准荐抗体使用量，如Test包装抗体，但为了达到很棒的实验效果及节省抗体，我们则需要自己做滴定，尤其在多指标流式检测实验中，抗体滴定就更加重要了

　　具体的抗体滴定步骤如下:

　　以APC-CD49b (BioLegend Ca#108909) 抗体为例，浓度为0.2mg/ml，推荐抗体使用浓度为 s0.25ug/100ul。起始滴定浓度一般为推荐浓度的两倍(即起始浓度为0.5ug/100ul) ，做8次2倍释。假设用100ul体积，在首孔/管的97.5ul稀释液里加入2.5ul抗体，然后从首孔管取出50ul加入第二孔/管的50ul稀释液中，从第二孔管中取出50ul加入至第三孔管的50ul稀释液，依次倍比得释，最后，向每个孔中加入50u细胞，注意整个提作，抗体要充分混匀。

　　抗体滴定并不是以抗体量细胞数来表示的，滴定的是抗体浓度(如ug/ml)，其与细胞量在标记10万和1000万个细胞范围内相关性不大。如果您准备用于标记1亿个细胞，千万不要将抗体用量也增加100倍，通常只需增加2 - 5倍即可，有时甚至不用增加用量，如果您经常标记1亿个细胞(如分选细胞时)，做2 - 3个点的快速滴定是很有用的。同样的道理，如果您只标记5万个细胞，那么也千万不要减少抗体用量。记住，与抗体用量相关的指标是浓度(抗体量染色体积)这意味着，如果你是100ul的体积下进行滴定抗体，而染色时使用1ml的体积，那么你就需要用10倍的抗体量，同样的道理，如果您在200ul体积下进行滴定，而染色时使用50ul体积，那么您就需要用114的抗体量。

　　染色之后，一般确定SI(染色指数)或S/N(信噪比)高的浓度，但有时也需要考虑一下抗体用量

　　Elisa试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。