古朵快讯：免疫组化安排样本的处理办法

　　安排处理

　　恰当的安排处理是做好免疫组化染色的先决条件，也是决议染色胜败的内部因素，在安排细胞材料预备的过程中，不只要求坚持安排细胞形状完整，更要坚持安排细胞的抗原性不受损或充满，避免安排自溶。如果呈现自溶坏死的安排，抗原现已丢掉，即运用很活络的检测抗体和高明的技能，也很难检出所需的抗原，反而往往由于安排的坏死或制片时的刀痕挤压，在上述区域易呈现假阳性成果。

　　1) 安排及时选材和固定

　　安排标本及时的选材和固定是做好免疫组化染色的要害*步，是有用避免安排自溶坏死，抗原丢掉的开始，离体安排应赶快的进行选材，2h内，选材时所用的刀应锋利，要一刀下去切开安排，不行重复切拉安排，形成安排的挤压，安排块巨细要适中，一般在2.5cm×2.5cm×0.2cm，牢记选材时安排块宁可面积大，千万不能厚的准则，(也就是说安排块的面积能够大到3cm×5cm，但安排块的厚度千万不能超越0.2cm，不然将晦气于安排的均匀固定)。固定液快速渗透到安排内部使安排蛋白能在一定时刻内敏捷凝结。然后无缺的保存抗原和安排细胞形状。

　　对于固定液的选择，准则上讲，应根据抗原的耐受性来选择相应的固定液，但除非是专项科研项目，在病理惯例作业很难做到这一点，由于病理的确诊和辨别确诊都是在惯例HE病理确诊的基础上决议是否进行免疫组化的染色，而HE染色的惯例安排处理是采用10%的中性缓冲福尔马林或4%缓冲多聚甲醛4倍于安排体积进行安排固定，使用其渗透性强，对安排的作用均匀进行固定，但安排固定时刻在l2h内，一般固定时刻不应超越24小时。随着固定时刻的延伸对安排抗原的检出强度将逐步下降。

　　2) 安排脱水、通明、浸蜡

　　安排经固定后进行脱水、通明、浸蜡和包埋。把握的准则是脱水通明要充分但不能过，浸蜡时刻要够，温度不能高，不然形成安排的硬脆使安排切片困难，即使能切片，由于安排的硬脆，也使切片不能无缺平整，染色过程中极易脱片，对免疫组化染色抗原的定位及布景都晦气，所以*脱水和二甲苯通明的时刻不宜过长，正常巨细的安排*脱水lh×3次，二甲苯通明lh×2次即可，浸蜡及包埋白腊温度不要超越65℃。

　　(一)标本的主要来源

　　1.活体组织：应取材于病变组织及病变与正常组织交界处，大小适中。减少对组织标本的损伤与挤压。

　　2.体液、穿刺液：可直接涂片或经离心后取沉淀物涂片。

　　3.培养细胞：悬浮培养的细胞经离心沉淀后做细胞涂片，盖玻片上的单层培养细胞直接固定。

　　(二)标本的固定与保存

　　1.标本固定的目的：使细胞内蛋白质凝固，细胞内分解酶反应终止，以防止细胞自溶，保持细胞形态和结构;保存组织细胞抗原性;防止标本脱落;除去妨碍抗体结合的类脂，便于保存;抑制组织中细菌的繁殖，防止组织腐败和在后续组织制备中的细胞结构和成分的改变。标本的固定应以不损伤细胞形态，不干扰固定后抗原的识别和结合为原则。

　　2.固定剂的选择：蛋白质类抗原，可用乙醇或甲醇固定;微生物抗原可用丙酮或三氯化碳固定;如需除去病毒的蛋白质外壳，可使用y蛋白酶;多糖类抗原用10%福尔马林固定或以微火加热固定;如有黏液物质存在，应用透明质酸酶等处理除去;类脂质丰富的组织进行蛋白、多糖抗原检测时，需用有机溶剂(乙m、丙酮等)处理除去类脂。组织标本常规固定液为中性缓冲甲醛。

　　3.制片方法的评价：冷冻和石蜡切片是免疫组化常用的制片方法。选冷冻切片。其操作简便，可避免石蜡切片因固定(甲醛)、脱水、浸蜡等对抗原所造成的损失，适用于不稳定的抗原。石蜡切片是研究形态学的主要制片方法，它不但是观察组织细胞结构的理想方法，而且可用在陈旧石蜡包埋材料免疫组化的回顾性研究。切片薄而有连续性，可长期保存。但对抗原的保存不如冷冻切片。

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