ELISA实验结果不显色的原因及实验中如何防止产生气泡

　　ELISA实验结果不显色是什么原因导致：

　　有很多一些新手ELISA试验人员来说，试验做得不理想是难免的事。这不，就在近期一个朋友找古朵生物小编咨询。这位朋友说道：“初次用间接法做ELISA试验，做了几回结果都没有显色，原因在哪里呢"

　　可能原因有这几个方面：

　　1.包被原：包括你的包被液有无问题，有没有配错。包被原一般加100微升，37度2小时;

　　2.关闭：关闭液用的是否合适?你说做了几回都没显色，空白孔也不显吗?假如空白也无色彩，那关闭就没有问题。一般关闭是200微升每孔，也能够满孔关闭

　　3.一抗：查看你的一抗是否失效。是否是在37度反响

　　4.二抗：底物，底物缓冲液……这些都要好好查看!

　　5.洗刷：用PBST洗刷，包被和关闭时洗板3次;一抗二抗洗刷5次，每次间隔3分钟。手工和机器洗刷没什么不同，就是省力一些。洗5次不会有负影响，在一抗和二抗洗刷过程中，恰恰需求多洗几回，这样有助于削减非特异性吸附。

　　ELISA试验中如何防止产生气泡：

　　一般气泡都是集合在酶标板的孔周围，导致孔中液体不能与孔壁有用触摸，使孔内反响不均一。

　　包被时有气泡的话，将导致包被不实践包被量下降--弱阳性乃至假阴性。

　　关闭时有气泡的话，将导致很多未结合位点的存在，引起非特异性结合--本底增高，假阳性。

　　加样时有气泡的话，抗原抗体不能有用的结合--弱阳性乃至假阴性。

　　加二抗时有气泡的话，抗原抗体不能有用的结合--弱阳性乃至假阴性(竞争法相反----假阳性)。

　　加显色液时有气泡的话---显色不。

　　加停止液时有气泡的话，1。不能停止反响 2。影响酶标仪比色，OD值增高

　　洗刷时有气泡的话，非特异性结合物不能洗去，做无用功。

　　防止办法：

　　1。加样时尽量接近孔底(不要触摸孔底)，用力均匀，不要过快过猛。

　　2。关闭时一定要加满孔，

　　3。洗刷时一定要加满孔(重要)，气泡会浮上来zui终驱除。手艺洗板时一定要吸干水分并用力拍干。

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