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Western Blot为何标记二抗而不是一抗?
发布时间:2020-05-14   点击次数:50次

    如果一抗上直接加标记,不但不能保证抗体抗原反映的特异性,也不能保证实验的可重复性。

    首先,由于抗体都是人工去设计的,对于一个人工设计的蛋白质来说,你可以设计一个很好的抗体与他结合;然而对于天然蛋白质,你不能保证一个很高的识别率和准确度。所以,针对1抗,我们可以设计出完美的2抗,然而针对原蛋白质,你无法设计一个特别完美的1抗。所以,直接标记1抗的出来的结果是不准确的,而标记2抗是相对于1抗直接标记来说更准确的,所以经过大量的实验之后人们抛弃了直接标1抗的方法。当然,标2抗也不是完全完美的,当然你也可以标3抗,4抗,不过那个成本就指数上升了,在保证一定的置信度的情况下,人们一般标到2抗就够了。

    其次,对于同一个抗原,不同来源的1抗所识别的位置可能会有很大差异。这样,你就无法保证试验的可重复性。而1抗作为抗原来讲,可以将它的抗原决定簇设计的一样,这样针对不同的1抗,2抗是可以保证差不多一个样子的。而且这也给节约成本和方便标记带来了方便。

    所以一般现在都是2步标记,第一个原因是主要的,第二个原因是次要的。

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