【古朵生物】ELISA试验操作失败的主要原因

　　我们知道，ELISA测定中影响要素较多，而且其操作中有一定的技术要求，在查验中除正常反响外，有时常可见到一些过错结果(即假阳性或假阴性)，那么致使试验不成功的主要原因有哪些咧?

　　标本的影响：

　　溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易发生假阳性。或许是溶血血清中含有过氧化酶物质(红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素)，在洗刷过程中往往难以*洗脱，它可使H2O2释放出原生态氧(O)，从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质，即显蓝色，发生假阳性。所以严峻溶血标本禁用。

　　第二，标本受细菌污染：

　　因菌体中或许含有内源性辣根过氧化物酶，因而，被细菌污染的标本同溶血标本相同，亦可发生非特异性显色而搅扰测定结果。

　　第三，标本保存不妥：

　　在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、形成假阳性;为克服上述搅扰，ELISA试剂盒测定的血清标本宜为新鲜收集;如不能立即测定，5d内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本，蛋白质部分浓缩，分布不均，应充沛混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振动。

　　第四，标本凝结不全：

　　在工作中，有时为了争取时间快速检测，常在血液还未开始凝结时即强行离心别离血清，使血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中能够形成肉眼可见的纤维蛋白块，易形成假阳性结果;因而血液标本收集后有必要使其充沛凝结后再别离血清。

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