丙酮酸(Pyruvic Acid PA)含量测定试剂盒

　　英文名称：Pyruvate (PA)Assay Kit

　　别名：丙酮酸试剂盒 PA Kit 丙酮酸(PA)试剂盒 丙酮酸(PA)测试盒

　　检测方法：常量法

　　规格：50管/48样

　　产品详细介绍

　　测定意义：

　　丙酮酸通过乙酰CoA连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。

　　测定原理：

　　丙酮酸与2,4-二硝j苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝j苯腙，在碱性溶液中呈色。

　　产品说明书

　　货号：QS2204 规格：50 管/48 样

　　丙酮酸(pyruvic acid PA)含量测定试剂盒说明书 可见分光光度法

　　正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

　　测定意义：

　　丙酮酸通过乙酰 CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。

　　测定原理：

　　丙酮酸与 2,4-二硝j苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝j苯腙，在碱性溶液中呈色。

　　自备实验用品及仪器：

　　可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

　　试剂的组成和配制：

　　提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存;

　　试剂一：液体 5mL×1 瓶， 4℃避光保存;

　　试剂二：液体 25mL×1 瓶， 4℃保存。

　　丙酮酸提取：

　　1、细菌或培养细胞：

　　先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个)：提取液体积(mL)为 500~1000：1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液)，超 声波破碎(冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次)，静置 30min， 8000g， 25℃离心 10min，取上清待测。

　　2、组织：

　　按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织，加 入 1mL 提取液)，进行冰浴匀浆，静置 30min，8000g，25℃离心 10min，取上清待测。

　　3、血清(浆)样品：

　　按照血清(浆)体积(mL)：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例(建议取 0.1mL 血清(浆)加入 1mL 提取液)，进行冰浴匀浆，静置 30min， 8000g，25℃离心 10min， 取上清待测。

　　测定步骤：

　　1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 520nm，蒸馏水调零。

　　2、取 300μ L 样本+100μ L 试剂一于 1.5mL EP 管中，混匀，静置 2min，加入 500μ L 试剂二， 混匀，于 520nm 波长处测定管吸光值 A。

　　丙酮酸含量计算：

　　1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0466x + 0.0675; x 为丙酮酸含量(µg/mL)，y 为吸光值。

　　2、按照血清(浆)体积计算

　　丙酮酸含量(μ g/mL)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V3×V1÷V2)=214.6×(A-0.0675)

　　3、按照蛋白浓度计算

　　丙酮酸含量(μ g/mg prot)=[(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(V1×Cpr)=21.46×(A-0.0675) ÷Cpr

　　4、按照样品质量计算

　　丙酮酸含量(µg/g 鲜重)= [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷(W ×V1÷V2)=21.46×(A-0.0675)÷W

　　3、按照细菌或细胞密度计算

　　丙酮酸含量( μ g/104 cell ) = [(A-0.0675)÷0.0466×V1]÷ ( 500×V1÷V2 ) =0.043×(A-0.0675)

　　V1：加入反应体系中样本体积，0.3mL;V2：加入提取液体积，1 mL;V3：加入血清(浆)体 积，0.1 mL; Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL;W：样本质量，g;500：细菌或细胞总数，500 万。

　　注意：低检测限为 1μ g/mL 或 1μ g/g 鲜重或 10ng/mg prot

　　丙酮酸(Pyruvic Acid PA)含量测定试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。