细胞周期检测试剂盒(PI)实验资料

　　细胞周期检测试剂盒是利用细胞内DNA能够和荧光染料结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。 细胞周期(cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，通常由G0/G1期、S期、G2期和M期组成。G1期：细胞开始RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体。S期：DNA开始合成，这时细胞核内DNA的含量介于G1期和G2期之间。当DNA复制结束成为4倍体时，细胞进入G2期。G2期的细胞继续合成RNA及蛋白质，直到进入M期。因此，单纯从DNA含量无法区分G2期和M期。一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，这两个细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期(G0期)，而G0期从DNA含量上同样无法与G1期区分。因此，整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。 PI为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA复制的S期细胞的荧光强度为1-2之间。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。

　　保存温度：-20℃避光

　　注意事项：

　　1.染液短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。

　　2.试剂拆封后请尽快使用完!

　　有效期：1年

　　检测方法：

　　流式细胞仪

　　适用样本：

　　1.悬浮细胞 2.贴壁细胞

　　产品特点：

　　产品应用

　　流式细胞仪

　　仪器准备

　　1.流式细胞仪

　　2.离心机

　　3.移液器

　　4.冰箱

　　5.冰盒

　　试剂准备：

　　1.PBS 缓冲液(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X))

　　2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)

　　耗材准备：

　　1.离心管

　　2.吸头

　　3.一次性手套

　　使用注意事项：

　　1.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

　　2.最好使用含EDTA的细胞消化液。

　　3.洗涤细胞离心转速不可超过800×g。

　　4.乙醇固定时离心大概采用2000×g力5分钟，离心力太小可能部分细胞难以沉淀。 5.固定时在振荡器上轻轻振荡细胞，并缓慢滴加75%乙醇，直接加入会导致细胞团聚的现象，很难重悬成单细胞。或者先用冷PBS悬浮细胞，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇，终浓度为70-90%乙醇。乙醇固定之后须无细胞沉淀。

　　使用方法：

　　1. 收集样本细胞，细胞数量在5-10X106个。

　　2. 用冷PBS洗涤细胞两次。

　　3. 在15ml离心管中，用500 μl PBS重悬细胞。

　　4. 滴加2-5ml冷乙醇4℃固定过夜或-20℃固定1小时。

　　5. 取5X106细胞，在15ml锥形离心管中1000×g离心10分钟，弃上清，收集细胞。

　　6. 用冷PBS洗涤细胞两次。

　　7. 用500 μl冷PBS重悬细胞。

　　8. 加入Rnase A溶液20 μl， 37℃水浴30分钟。

　　9. 用400目细胞筛网过滤。

　　10. 在1000×g离心10分钟，弃上清，收集细胞。

　　11. 加入400 μl PI染液重悬细胞，轻轻混匀后4℃避光孵育30分钟-1小时。

　　12. 流式检测结果。激发波长为488nm。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。

　　常见问题分析：

　　1.染色后找不到细胞?

　　固定细胞可能难以离心沉淀;固定细胞可能成团;固定细胞膜容易损伤成碎片。操作过程中注意以上几点。

　　2.可以不固定细胞吗?

　　本试剂盒可以用于非固定细胞的周期检测。

　　细胞周期检测试剂盒 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦东新区。是一家专门从事生物技术相关产品，励志研发和销售的综合性生物公司，产品远销多个国家和地区，我们将一如既往地秉承“一切为了满足客户的需求"的经营宗旨;牢固树立“以客户需求为准则、以市场需求为导向，不断开发高质量的新产品，提供客户满意的综合服务质量"的方针。