ELISA实验的五种原理及常见问题解析

　　ELISA试剂盒在国内有许多种叫法，例如：ELISA检测试剂盒、ELISA Kit、酶联免疫试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒、酶联免疫分析试剂盒、酶免试剂盒等，比较常见的叫法是ELISA检测试剂盒、酶联免疫吸附测定试剂盒等。

　　ELISA试剂盒实验常用的非离子型去污剂。这种封闭液便宜、稳定，在去除洗涤过程中的一些非异结合上很有用。但它们只在存在时起作用，ELISA试 剂盒因为很容易被洗掉。因此所有洗涤液中也必须添加封闭液。请勿使用高浓度(正常浓度为0.01-0.1%)，它会降低异结合，产生假阴性。另一个选择是使用蛋白和非离子型去污剂这两种封闭液，后者可协助洗涤过程中的封闭。

　　1.双抗夹心法：适用于大分子物质的检测。将已知的可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体表面，利用抗原抗体异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法,具有快速、灵敏、简便等。

　　2.竞争法：竞争法适用于较少表位的小分子物质。将抗体包被于微孔板中，加入无关蛋白载体封闭未结合位点，加入标准品和生物s标记的抗原物质进行竞争结合。

　　3.直接法：主要用于抗原的检测，将抗原直接固定在固相载体上，洗涤后加入酶标异性抗体，洗涤后加入底物显色，该方法对抗体的异性要求较高。

　　4.间接法：主要用于抗体的检测。将异性抗原包被在固相载体表面，与标本中相应异性抗体结合，洗涤后加入酶标的抗体，洗涤后加入底物显色。该方法对抗原的异性要求较高。

　　5.捕获法：捕获法主要用于血清中某种抗体亚型的检测。先将针对 IgM的第二抗体连接与固相载体，用以结合样品中的所有 IgM，洗涤除去 IgG等无关的物质，然后加入异性抗原与待检 IgM结合，再加入抗原异的酶标抗体，后形成固相二抗-IgM-抗原-酶标抗体复合物，加酶底物显色即可对样品中待检 IgM是否存在及其含量进行测定。

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