细胞三磷酸腺苷酶活性染色试剂盒技术资料

　　产品说明书(中文版)

　　主要用途

　　细胞三磷酸腺苷酶(ATP酶)活性染色试剂是一种旨在使用钙激活技术，在碱性条件下，由三磷酸腺苷酶催化水解产生的磷酸与钙离子结合，经过氯化钴的替换，zui后在硫化铵存在的情况下，呈现细胞样本中酶活性部位的棕黑色沉淀现象的而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于各种动物和人体细胞ATP酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，灵敏牢固，显色清晰。

　　三磷酸腺苷酶或ATP酶(adenosinetriphosphatase;ATPase)可催化ATP水解生成ADP及无机磷的反应，这一反应放出大量能量，用于运送离子进出细胞，同时供给生物体进行需能生命过程。它存在于生物细胞的多个部位，比如细胞质膜上和叶绿体类囊体膜上等，对整个生命的维持有着重要的作用。膜结合ATP酶存在多种形式：钠钾ATP酶、胞膜钙泵ATP酶(plasma membrane calcium ATPase;PMCA)或肌质网/内质网钙泵ATP酶(sarcoplasmic or endoplasmic reticulum calcium ATPases;SERCA)、氢钾ATP酶(hydrogen/potassium ATPase)或胃质子泵(gastric proton pump)等。

　　产品内容

　　碱性液(Reagent A)毫升

　　反应液(Reagent B)毫升

　　激活液(Reagent C)毫升

　　置换液(Reagent D)毫升

　　清理液(Reagent E)毫升

　　显色液(Reagent F)毫升

　　产品说明书 1份

　　保存方式

　　保存反应液(Reagent B)在-20℃冰箱里，避免反复冻融，避免光照;其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

　　用户自备

　　苏木素复染试剂盒：用于常规染色后复染

　　培养箱：用于反应孵育

　　光学显微镜：用于染色后观察分析

　　实验步骤

　　实验开始前，将试剂盒里的反应液(Reagent B)从-20℃的冰箱里取出，放进冰槽里融化，避免光照。然后进行下列操作：

　　操作一、25cm2细胞培养瓶染色

　　样本激活处理

　　小心抽去25cm2细胞培养瓶里的培养液

　　小心加入xx毫升碱性液(Reagent A)铺满整个样品表面

　　小心抽去碱性液(Reagent A)

　　小心加入x毫升反应液(Reagent B)，铺满整个样品表面

　　放进37℃培养箱里，孵育30分钟

　　小心抽去反应液(Reagent B)

　　小心加入xx毫升激活液(Reagent C)，铺满整个样品表面

　　室温下孵育2分钟

　　小心抽去 激活液(Reagent C)

　　重复实验步骤7至9二次

　　二、样本染色处理

　　小心加入xx毫升置换液(Reagent D)，铺满整个样品表面

　　室温下孵育2分钟

　　小心抽去置换液(Reagent D)

　　小心加入xx毫升清理液(Reagent E)

　　室温下孵育2分钟

　　小心抽去清理液(Reagent E)

　　小心加入xx毫升显色液(Reagent F)，铺满整个样品表面

　　室温下孵育30至60秒;或直至可见棕黑色

　　小心抽去显色液(Reagent F)

　　小心加入xx毫升清理液(Reagent E)

　　室温下孵育2分钟

　　小心抽去清理液(Reagent E)

　　(选择步骤)样本复染处理

　　样本复染处理(苏木素)

　　即刻在一般光学显微镜下观察：酶活性阳性部位呈现深浅不一的棕黑色(如果复染，则细胞核为蓝色)

　　操作二、24孔细胞培养板染色

　　样本激活处理

　　小心抽去24孔细胞培养板里的培养液

　　小心加入xx微升碱性液(Reagent A)，铺满整个样品表面

　　小心抽去碱性液(Reagent A)

　　小心加入xx微升反应液(Reagent B)，铺满整个样品表面

　　放进37℃培养箱里，孵育30分钟

　　小心抽去反应液(Reagent B)

　　小心加入xx微升激活液(Reagent C)，铺满整个样品表面

　　室温下孵育2分钟

　　小心抽去激活液(Reagent C)

　　重复实验步骤7至9二次

　　二、样本染色处理

　　小心加入xx微升置换液(Reagent D)，铺满整个样品表面

　　室温下孵育2分钟

　　小心抽去置换液(Reagent D)

　　小心加入xx微升清理液(Reagent E)

　　室温下孵育2分钟

　　小心抽去清理液(Reagent E)

　　小心加入xx微升显色液(Reagent F)，铺满整个样品表面

　　室温下孵育30至60秒;或直至可见棕黑色

　　小心抽去显色液(Reagent F)

　　小心加入xx微升清理液(Reagent E)

　　室温下孵育2分钟

　　小心抽去清理液(Reagent E)

　　(选择步骤)样本复染处理

　　样本复染处理(苏木素)

　　即刻在一般光学显微镜下观察：酶活性阳性部位呈现深浅不一的棕黑色(如果复染，则细胞核为蓝色)

　　注意事项

　　本产品为50次(2个24孔板)或10次(10个25cm2细胞培养瓶)操作

　　操作时，须带手套

　　每次更换试剂溶液时，须抽干残留液体

　　整个操作，在避光状态下进行

　　细胞染色注意不要过度

　　避免使用有机溶剂(乙醇、二甲苯等)脱水、澄清处理

　　细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察

　　本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整试剂溶液：

　　操作容器建议试剂溶液规格

　　载玻片100微升

　　载玻片培养皿1毫升

　　35mm培养皿1毫升

　　96孔培养板100微升

　　48孔培养板200微升

　　24孔培养板500微升

　　12孔培养板1毫升

　　6孔培养板2毫升

　　25cm2细胞培养瓶3毫升

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